ABSTRACT Poultry and other types of meat from infected animals are important vehicles of salmonellosis. Objective: To determine the susceptibility to antimicrobial agents and serovarieties of Salmonella isolated from meat and meat products. Material and Methods: A total of 159 isolates were analyzed at the Cuban National Institute of Hygiene, Epidemiology and Microbiology during the period between January 2012 and March 2020. Serotypes were determined according to ISO/TR 6579-3: 2014. Antimicrobial susceptibility was determined by the Bauer-Kirby technique, according to the methodology described in the regulations of the Clinical and Laboratory Standards Institute. Results: The most frequent serovarieties identified were S. Enteritidis, S. Agona, S. Derby, S. Infantis and S. London. Also, 18 (43, 9 %) of serovarieties identified in fresh meat were found in processed meat. The highest percentages were related to antimicrobial resistance to nalidixic acid, tetracycline and ampicillin. S. Enteritidis and S. Typhimurium serotypes showed resistance to a greater number of antibiotics. Conclusions: The results suggest that fresh meats are an important source of Salmonella contamination, including those that are carriers of antimicrobial-resistant pathogens.

RESUMEN Introducción: La carne de ave y otros tipos de carnes provenientes de animales infectados son importantes vehículos de salmonelosis. Objetivo: Determinar la susceptibilidad a los antimicrobianos y las serovariedades de Salmonella aisladas en carnes y productos cárnicos. Material y Métodos: Se analizaron 172 aislados en el período enero de 2012 a marzo de 2020 en el laboratorio de Microbiología del Instituto Nacional de Higiene Epidemiología y Microbiología de Cuba. El serotipaje se determinó según la norma ISO/TR 6579-3:2014. La susceptibilidad antimicrobiana se realizó mediante el método de difusión con discos (Bauer-Kirby) de acuerdo con la metodología descrita en la normativa del Instituto de Normas Clínicas y de Laboratorio. Resultados: Las serovariedades identificadas con mayor frecuencia fueron: S. Enteritidis, S. Agona, S. Derby, S. Infantis y S. London, 18 (43,9 %) serovariedades identificadas en las carnes frescas también se encontraron en las procesadas. Los porcentajes más altos de resistencia antimicrobiana se hallaron frente al ácido nalidíxico, la tetraciclina y la ampicilina.S. Enteritidis y S. Typhimurium expresaron resistencia a un mayor número de antibióticos. Conclusiones: Los resultados sugieren que las carnes frescas constituyen una fuente de diseminación de Salmonella, incluso aquellas portadoras de resistencia a los antimicrobianos.

Abstract INTRODUCTION Antimicrobial drug resistance constitutes a health risk of increasing concern worldwide. One of the most common avenues for the acquisition of clinically-relevant antimicrobial resistance can be traced back to the food supply, where resistance is acquired through the ingestion of antimicrobial resistant microorganisms present in food. Antimicrobial resistance constitutes a health risk, leading to production losses and negative consequences for livelihood and food safety. OBJECTIVE Determine whether resistant bacteria are present in foods in Cuba. METHODS A descriptive observational study was conducted in the Microbiology Laboratory of Cuba’s National Institute of Hygiene, Epidemiology and Microbiology from September 2004 through December 2018. Researchers analyzed 1178 bacterial isolates from food samples. The isolates were identified as Escherichia coli, Salmonella, Vibrio cholerae and coagulase-positive Staphylococcus. The antimicrobial susceptibility study was performed using the Bauer-Kirby disk diffusion method, following procedures outlined by the Clinical and Laboratory Standards Institute. The data were analyzed using WHONET version 5.6. RESULTS Of the total isolates, 62.1% were resistant to at least one antibiotic. Within each group, >50% of isolates showed some type of resistance. E. coli and V. cholerae exceeded 50% resistance to tetracycline and ampicillin, respectively. Staphylococcus showed the highest resistance to penicillin, and Salmonella to tetracycline, nalidixic acid and ampicillin. The highest percentages of non-susceptible microorganisms were identified in meats and meat products. CONCLUSIONS These results serve as an alert to the dangers of acquiring antibiotic-resistant bacteria from food and demonstrate the need to establish a surveillance system and institute measures bacterial control in food products.

ABSTRACT Introduction: The alarming increase of antibiotics resistance in bacteria is one of the greatest problems in Public Health. Bacteria in aquatic environments can transfer antimicrobial resistance genes to other bacteria, including pathogenic bacteria for humans, which is a health risk. Objective: To determine the antimicrobial resistance in bacterial isolates from fish and shellfish. Materials and methods: A total of 154 bacterial isolates were analyzed in fish and shellfish in the microbiology laboratory of the National Institute of Hygiene, Epidemiology and Microbiology. Antimicrobial susceptibility was determined by the Kirby- Bauer disc diffusion method according to the regulations of the Clinical and Laboratory Standards Institute. The analysis of the results was carried out by the WHONET 5.6 program. Results: Resistance was identified in two strains of Salmonella and six ones of Escherichia coli, the resistance to ampicillin and tetracycline was higher. A multiresistance pattern was identified in multiresistant staphylococcus to chloramphenicol, erythromycin and tetracycline. Vibrio cholerae was the most frequent genus found in fish and shellfish; resistant strains were more frequent in oysters and freshwater fish. Conclusions: The highest percentages of resistance were determined for ampicillin and tetracycline in the total of microorganisms studied. The oyster was considered the greatest risk product of dissemination of antimicrobial-resistant bacteria.

RESUMEN Introducción: El alarmante incremento de la resistencia bacteriana frente a los antibióticos constituye uno de los mayores problemas en Salud Pública. Las bacterias de ambientes acuáticos pueden transferir genes de resistencia antimicrobiana a otras bacterias, incluyendo las patógenas para el hombre, lo cual constituye un riesgo. Objetivo: Determinar la resistencia a los antimicrobianos en aislamientos bacterianos de pescados y mariscos. Materiales y métodos: Se analizaron 154 aislamientos bacterianos en pescados y mariscos en el Laboratorio de Microbiología del Instituto Nacional de Higiene Epidemiología y Microbiología. La susceptibilidad antimicrobiana, se determinó mediante el método de difusión con discos (Bauer-Kirby), según la normativa del Clinical and Laboratory Standards Institute. El análisis de los resultados se realizó mediante el programa WHONET 5.6. Resultados: Se Identificó resistencia en dos cepas de Salmonella y seis de E. coli, la resistencia se expresó con mayor frecuencia para para la ampicilina y la tetraciclina. En Staphylococcus se determinó un patrón de multirresistencia para el cloranfenicol, la eritromicina y la tetraciclina. Vibrio cholerae fue el género con mayor aislamiento en pescados y mariscos, las cepas resistentes fueron más frecuentes en ostiones y pescados de aguas dulces. Conclusiones: Se determinaron los mayores porcentajes de resistencia para la ampicilina y la tetraciclina en el total de los microorganismos estudiados. El ostión se consideró el producto de mayor riesgo de diseminación de bacterias resistentes a los antimicrobianos.

Introduction: technical Committee on Food Microbiology No. 61 has proposed an update of the first Cuban Standard for Microbiological Contaminants, published in 1987. Objectives: analyze and propose microbiological criteria for second and third class food sampling which would reflect the country's climatic and ecological conditions, as well as the different forms of food preparation and consumption. Methods: food groups, microbiological parameters, health hazard categories, a sampling plan and microbiological criteria were established, based on Cuban standard NC 38-02-07:1987, the database of results obtained by national food analysis laboratories, and scientific bibliography. Results: seventeen human and animal food groups were defined. New microbiological parameters were included, those contained in standard NC 38-02-07:1987 were retained, and specifications were developed for surveillance parameters. Food products were classified into ten categories according to the risk involved, and representative sampling plans were applied based on n 5. The required microbiological criteria were established. Results were classified into three categories: acceptable, fairly acceptable and rejectable. Conclusions: with implementation of the standard, consumer protection was improved and product-related risks were reduced to a minimum.

Introducción: en Cuba se editó la primera Norma Cubana de Contaminantes Microbiológicos en 1987, a partir de la cual se propuso una actualización por el Comité Técnico de Microbiología de los Alimentos No 61. Objetivos: analizar y proponer criterios microbiológicos para los muestreos de segunda y tercera clases en alimentos, que respondieran a las condiciones climáticas y ecológicas del país, y a la forma de preparación y consumo de los productos. Métodos: se procedió a establecer grupos de alimentos, parámetros microbiológicos, categoría en relación con el peligro sanitario, plan de muestreo y criterios microbiológicos, para lo que se tomó en cuenta la NC 38-02-07:1987, la base de datos de los resultados de los laboratorios nacionales de análisis de alimentos y la literatura científica. Resultados: se definieron 17 grupos de alimentos, para consumo humano o animal. Se incluyeron nuevos parámetros microbiológicos a controlar, se mantuvieron los que aparecían en la NC 38-02-07,1987 y se especificaron los que se evaluaban en vigilancia. Se clasificaron los productos en diez categorías de acuerdo con el riesgo que involucraban y se aplicaron planes de muestreo representativos, con el uso de n 5. Se establecieron los criterios microbiológicos. La interpretación de resultados se resumió en tres categorías: aceptable, medianamente aceptable y rechazable. Conclusiones: con la implementación de esta Norma se logró una mayor protección al consumidor y reducir al mínimo el riesgo del producto.

Introduction Listeria monocytogenes is a pathogen that can be vegetable-borne. Its incidence on this type of food is unknown in Cuba. Objectives To evaluate the presence of Listeria spp. and the effect of cleaning methods in fresh vegetables on sale in the City of Havana. Methods Eighty six samples were analyzed by using Rapid Test Oxoid (1999) and the traditional ISO 11290-1 (1996) and ISO 11290-2 (1998) methods. Also additional biochemical tests and cold enrichment to 4 ºC, were made. Health quality indicators, coliforms (NC ISO 4832/2002) and faecal coliforms (NC 38-02-14/1989) were determined. The presence or absence of bacteria after the cleaning process was determined in samples positive to Listeria spp. and in contaminated samples with Listeria monocytogenes. Results Listeria spp. was detected by the rapid test in lettuce, carrot, cabbage and scallion; Listeria innocua was isolated in the last three ones at<10² UFC/g concentrations. These samples showed coliforms at>10³/g concentrations and two of them faecal coliforms at>10²/g. After the cleaning process, no bacteria was detected in previously L. innocua positive carrot and scallion samples whereas in lettuce and carrot samples innoculated with L. monocytogenes and cleaned, the level of this microorganism was just reduced. It was confirmed that the traditional cleaning process to eliminate L. monocytogenes is not enough unless this bacterium is present at low concentrations. Conclusions The only isolated species L. innocua was not a health risk. Listeria spp.-positive samples did not have good sanitary quality.

Introducción Listeria monocytogenes es un patógeno que puede transmitirse por el consumo de hortalizas, en Cuba no se conoce su incidencia en estos alimentos. Objetivos Evaluar la presencia de Listeria spp. y el efecto de los procedimientos de limpieza, en hortalizas frescas comercializadas en Ciudad de La Habana. Métodos Se estudió Listeria spp. en 86 muestras, mediante el método rápido de Oxoid (1999) y los métodos ISO 11290-1/1996 e ISO 11290-2/1998, se realizó enriquecimiento en frío y pruebas bioquímicas complementarias. Se determinaron indicadores de calidad sanitaria, coliformes (NC ISO 4832/2002) y coliformes fecales (NC 38-02-14/1989). Se comprobó la presencia o no de la bacteria después del proceso de limpieza, en muestras positivas a Listeria spp. y en muestras inoculadas con Listeria monocytogenes. Resultados En frijolitos chinos, lechuga, zanahoria, col y cebollino se detectó Listeria spp. por la prueba rápida; sólo en las tres últimas muestras se aisló L. innocua, en concentraciones <10²/g. Estas muestras presentaron coliformes >10³/g y dos de ellas, coliformes fecales >10²/g. Después del proceso de limpieza no se detectó la bacteria en cebollino y zanahoria positivos a L. innocua, mientras que en lechuga y zanahoria inoculadas con L. monocytogenes, sólo se redujo la carga microbiana. Se comprobó que no es suficiente el proceso tradicional de limpieza para eliminar L. monocytogenes a menos que se halle en bajas concentraciones. Conclusiones La única especie identificada fue L. innocua, que no constituye un riesgo para la salud. Las muestras positivas a Listeria spp. no poseen una buena calidad sanitaria.

Introduction Enterobacter sakazakii is an emerging pathogen that has been isolated in milk powder preparations for infant in the last few years. Practically there is no research works about this microorganism in developing countries; in Cuba this is the first study. Objectives To detect the presence of E. sakazakii in imported milk powder samples. Methods Sixty samples of whole and skimmed powdered milk imported from 9 countries were analyzed. Before applying API 20E Kit, the recommended technique by US regulatory bodies including conventional biochemical tests was used. Kligler´s iron agar and Simmons´s citrate agar were employed; other tests such as obtaining of triptophane from indole, Voges Proskauer reaction, methyl red, lysine and ornitine decarboxylation, arginine dihydrolysis, production of sucrose acid, dulcit, adonit, raffinose and sorbitol were performed in presumptive Enterobacter strains. Results Enterobacteria were isolated in 26 samples. Just one strain was classified as E. sakasakii using the traditional biochemical tests and further confirmed by API 20E for 1.6 % possitivity of the sample. Conclusions Generally speaking, the microbiological quality of powered milk samples was good. The technique used to determine E. sakazakii in powered milk samples, including conventional biochemical tests, is feasible to be performed in Cuba in order to reduce costs inherent to the use of API 20E. It is important to conduct these studies in hospital settings, particularly in those areas where milk formulae for neonates are prepared.

Introducción Enterobacter sakazakii es uno de los microorganismos patógenos emergentes que han hecho su aparición en los últimos años, fundamentalmente como contaminante ocasional de las fórmulas infantiles en polvo. En países en vías de desarrollo no existen suficientes investigaciones sobre este microorganismo, en Cuba este constituye el primer estudio realizado. Objetivos Conocer la presencia de E. sakazakii en muestras de leche en polvo de importación. Métodos Se analizaron 60 muestras de leche en polvo, entera y descremada, provenientes de nueve países, se siguió la técnica recomendada por autoridades reguladoras de EE.UU., con la inclusión de pruebas bioquímicas convencionales como alternativa antes de aplicar el sistema de identificación API 20E. Se empleó el agar hierro Kligler y el agar citrato de Simmons; en aquellas cepas con imagen sugestiva de Enterobacter se comprobó la obtención de triptofano a partir de indol, reacción de Voges Proskauer y rojo de metilo, descarboxilación de lisina y ornitina, dihidrólisis de la arginina, producción de ácido de sacarosa, dulcitol, adonitol, rafinosa y sorbitol. Resultados Se obtuvo crecimiento de enterobacterias en 26 muestras. Una sola cepa dio resultado presuntivo de E. sakazakii por pruebas bioquímicas, la misma se confirmó por API 20E para 1,6 % de positividad. Conclusiones En general la calidad microbiológica de las muestras de leche estudiadas fue buena. La técnica empleada para determinar E. sakazakii en muestras de leche en polvo, con la inclusión de pruebas bioquímicas convencionales, es factible de realizar en Cuba, para minimizar los costos asociados a la utilización de API 20E. Sería importante continuar estos estudios en áreas hospitalarias, especialmente aquellas donde se preparan fórmulas lácteas para recién nacidos.

Introduction: Enterobacter sakazakii is an emerging pathogen that has been isolated in milk powder preparations for infant in the last few years. Practically there is no research works about this microorganism in developing countries; in Cuba this is the first study. Objectives: To detect the presence of E. sakazakii in imported milk powder samples. Methods: Sixty samples of whole and skimmed powdered milk imported from 9 countries were analyzed. Before applying API 20E Kit, the recommended technique by US regulatory bodies including conventional biochemical tests was used. Kligler's iron agar and Simmons's citrate agar were employed; other tests such as obtaining of triptophane from indole, Voges Proskauer reaction, methyl red, lysine and ornitine decarboxylation, arginine dihydrolysis, production of sucrose acid, dulcit, adonit, raffinose and sorbitol were performed in presumptive Enterobacter strains. Results: Enterobacteria were isolated in 26 samples. Just one strain was classified as E. sakasakii using the traditional biochemical tests and further confirmed by API 20E for 1.6 % possitivity of the sample. Conclusions: Generally speaking, the microbiological quality of powered milk samples was good. The technique used to determine E. sakazakii in powered milk samples, including conventional biochemical tests, is feasible to be performed in Cuba in order to reduce costs inherent to the use of API 20E. It is important to conduct these studies in hospital settings, particularly in those areas where milk formulae for neonates are prepared.

Introducción: Enterobacter sakazakii es uno de los microorganismos patógenos emergentes que han hecho su aparición en los últimos años, fundamentalmente como contaminante ocasional de las fórmulas infantiles en polvo. En países en vías de desarrollo no existen suficientes investigaciones sobre este microorganismo, en Cuba este constituye el primer estudio realizado. Objetivos: Conocer la presencia de E. sakazakii en muestras de leche en polvo de importación. Métodos: Se analizaron 60 muestras de leche en polvo, entera y descremada, provenientes de nueve países, se siguió la técnica recomendada por autoridades reguladoras de EE.UU., con la inclusión de pruebas bioquímicas convencionales como alternativa antes de aplicar el sistema de identificación API 20E. Se empleó el agar hierro Kligler y el agar citrato de Simmons; en aquellas cepas con imagen sugestiva de Enterobacter se comprobó la obtención de triptofano a partir de indol, reacción de Voges Proskauer y rojo de metilo, descarboxilación de lisina y ornitina, dihidrólisis de la arginina, producción de ácido de sacarosa, dulcitol, adonitol, rafinosa y sorbitol. Resultados: Se obtuvo crecimiento de enterobacterias en 26 muestras. Una sola cepa dio resultado presuntivo de E. sakazakiipor pruebas bioquímicas, la misma se confirmó por API 20E para 1,6 % de positividad. Conclusiones: En general la calidad microbiológica de las muestras de leche estudiadas fue buena. La técnica empleada para determinar E. sakazakii en muestras de leche en polvo, con la inclusión de pruebas bioquímicas convencionales, es factible de realizar en Cuba, para minimizar los costos asociados a la utilización de API 20E. Sería importante continuar estos estudios en áreas hospitalarias, especialmente aquellas donde se preparan fórmulas lácteas para recién nacidos.

Introduction: Listeria monocytogenes is a pathogen that can be vegetable-borne. Its incidence on this type of food is unknown in Cuba. Objectives: To evaluate the presence of Listeria spp. and the effect of cleaning methods in fresh vegetables on sale in the City of Havana. Methods: Eighty six samples were analyzed by using Rapid Test Oxoid (1999) and the traditional ISO 11290-1 (1996) and ISO 11290-2 (1998) methods. Also additional biochemical tests and cold enrichment to 4 ºC, were made. Health quality indicators, coliforms (NC ISO 4832/2002) and faecal coliforms (NC 38-02-14/1989) were determined. The presence or absence of bacteria after the cleaning process was determined in samples positive to Listeria spp. and in contaminated samples with Listeria monocytogenes. Results: Listeria spp. was detected by the rapid test in lettuce, carrot, cabbage and scallion; Listeria innocua was isolated in the last three ones at<10² UFC/g concentrations. These samples showed coliforms at>10³/g concentrations and two of them faecal coliforms at>10²/g. After the cleaning process, no bacteria was detected in previously L. innocua positive carrot and scallion samples whereas in lettuce and carrot samples innoculated with L. monocytogenes and cleaned, the level of this microorganism was just reduced. It was confirmed that the traditional cleaning process to eliminate L. monocytogenes is not enough unless this bacterium is present at low concentrations. Conclusions The only isolated species L. innocua was not a health risk. Listeria spp.-positive samples did not have good sanitary quality.

Introducción: Listeria monocytogenes es un patógeno que puede transmitirse por el consumo de hortalizas, en Cuba no se conoce su incidencia en estos alimentos. Objetivos: Evaluar la presencia de Listeria spp. y el efecto de los procedimientos de limpieza, en hortalizas frescas comercializadas en Ciudad de La Habana. Métodos: Se estudió Listeria spp. en 86 muestras, mediante el método rápido de Oxoid (1999) y los métodos ISO 11290-1/1996 e ISO 11290-2/1998, se realizó enriquecimiento en frío y pruebas bioquímicas complementarias. Se determinaron indicadores de calidad sanitaria, coliformes (NC ISO 4832/2002) y coliformes fecales (NC 38-02-14/1989). Se comprobó la presencia o no de la bacteria después del proceso de limpieza, en muestras positivas a Listeria spp. y en muestras inoculadas con Listeria monocytogenes. Resultados: En frijolitos chinos, lechuga, zanahoria, col y cebollino se detectó Listeria spp. por la prueba rápida; sólo en las tres últimas muestras se aisló L. innocua, en concentraciones <10²/g. Estas muestras presentaron coliformes >10³/g y dos de ellas, coliformes fecales >10²/g. Después del proceso de limpieza no se detectó la bacteria en cebollino y zanahoria positivos a L. innocua, mientras que en lechuga y zanahoria inoculadas con L. monocytogenes, sólo se redujo la carga microbiana. Se comprobó que no es suficiente el proceso tradicional de limpieza para eliminar L. monocytogenes a menos que se halle en bajas concentraciones. Conclusiones: La única especie identificada fue L. innocua, que no constituye un riesgo para la salud. Las muestras positivas a Listeria spp. no poseen una buena calidad sanitaria.